Evaluación de la Dúplex PCR para el diagnóstico simultáneo de Mycobacterium spp. y Brucella spp. en bovinos

Ariel Escobar, Orly Cevallos, Samir Zambrano, Jaime Morante, Mercedes Carranza, Enrique Nieto, María Cadme, Edgar Pinargote

Resumen


La tuberculosis y la brucelosis siguen siendo causas importantes de morbilidad y mortalidad en muchos países, para la detección de ambas enfermedades se requieren de herramientas eficientes y sensibles para efectivizar el diagnóstico. Este trabajo fue dirigido a evaluar y comparar la técnica de Dúplex PCR frente a la PCR anidada, para la detección de Brucella spp. (BR) y Mycobacterium spp. (TB). Se utilizó un total de 100 muestras de tejidos a partir de nódulos linfáticos traqueo bronquiales, pulmón de bovinos y, aislados bacterianos de TB y BR como controles positivos. Diez combinaciones de iniciadores dirigidos a flanquear un segmento de la secuencia 16S ARNr (BR) y el gen antígeno MPB70 (TB) fueron evaluados, el mejor resultado para la Dúplex PCR se logró con los iniciadores Bru-2F/Bru-2R para BR y para TB, Tub-1F/Tub-N-R. Los productos de amplificación fueron de 225 y 230-pb respectivamente. A fin de potencializar los resultados de la técnica propuesta, todas las muestras fueron inicialmente analizadas y comparadas entre la PCR simple y la PCR anidada (Kappa, k = 0,85) y, la concordancia entre los resultados obtenidos con la PCR anidada y la Dúplex PCR (k = 0,88), para las dos bacterias fue muy buena.

Palabras clave


Bovinos, brucelosis, detección, tejidos, tuberculosis

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Received: 22/01/13

Accepted: 22/03/13

Corresponding author: E-mail: telarieles@hotmail.com (A. Escobar)




DOI: http://dx.doi.org/10.17268/sci.agropecu.2013.01.04

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